磁力柱细胞分选-更高效的细胞分选手段

2024-09-23 13:27
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磁珠法细胞分选,是结合了磁力学、免疫学和细胞生物学的一种分离技术。基于偶联有特异性识别抗体的磁珠,使细胞在经过磁场时得到分离,这就是细胞磁性分选的基本原理。由于其操作简单,可在较短时间内获得高纯度、高活力的目的细胞,且无需大型仪器,成为细胞分选中应用较为广泛的方法之一。


根据磁珠法分选细胞时,是否使用了分离柱,将分选方式分为有柱式和无柱式两种。

01
无柱式分选:

     使用过程时,将装有样本的试管置于磁场中,被磁性标记的细胞则可聚集固定,无磁性标记的细胞等杂质,则可直接倾倒或利用移液器吸出转移;撤去磁场后,加入液体则可重悬磁性标记的细胞。

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                (*图片来源于网络侵删*)

02
有柱式分选:

     使用过程中,当样本流经离心柱时,磁性标记的细胞将被吸附固定于离心柱中,液体则在流动过程中被分离,撤去磁场后,再加入液体则可收集离心柱中磁性标记的细胞。

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                 (*图片来源于网络侵删*)


有柱式分选即磁力柱细胞分选优势主要有两点:


节约表位——

对于低丰度或弱表达的细胞表面标记物而言,表现得更为突出。由于该类型标记物的表达数量本身就少,极少量的标记意味着只有少部分的表面位点被磁珠占用,仍有很多的空余位点可被其他识别抗体标记,以进行如流式细胞分析用。比如我们需要对 PBMC 中的 CD4+T 细胞进行富集分选时,若使用了 CD4 磁珠标记并配合柱式分选后,可直接使用 CD4-PE 的流式抗体孵育后进行流式分析,富集后的目的细胞纯度高和回收率高;但如果是采用非柱式分选,则需要通过加大磁珠的标记量以达到增加磁力以保证 CD4+ 细胞被充分滞留于磁场中,这样在进行后续标记时,就必须选用其它 CD Marker 以进行流式分析,因为此时 T 细胞表面所有的 CD4 表位都已经被磁珠占据而无法进行抗体结合。


回收率高——

在阴性分选中,无柱分选的缺点在于,由于磁场强度有限,为了充分标记所有非目的细胞,磁珠会过度标记包括目的细胞在内的所有细胞,导致从磁场中穿过的目的细胞并非真正的无标记。由于这种非特异性过度标记,会导致细胞的回收率大幅降低。


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有柱式分选使用的为纳米级小磁珠,这类磁珠的直径在 50 nm 左右,且形成极度均一的胶体结构。从实际操作和实验结果来看,胶体的好处就是磁珠始终均匀分布,无需任何涡旋或震荡,只需吸取推荐的体积数即可, 保证了实验的准确性和高度可重复性。因此,磁力柱细胞分选可能是细胞分选的更优化分选手段。


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